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DNA鉴定之DNA定量

      为了确保提取出的DNA是来自人类而不是细菌之类的其他来源,DNA咨询委员会的标准9.3要求进行人类特异的DNA定量。只有当DNA提取后,才能进行可靠的定量和定性。对于大多数PCR反应,确定样本中DNA的量是必要的,因为PCR反应的最佳模板浓度范围是较窄的,例如,ABI的Profiler PlusTM和CofilerTM复合扩增试剂盒特别要求DNA模板量在1-2.5ng,会得到最优的结果(ABI,1998)。Promega的STR试剂盒也是在同样的DNA模板浓度范围才会有最佳的结果(Krenke et a1.,2002)。过量的DNA模板会导致分析中的分裂峰形或者峰高超出分析范围。过少的DNA模板会导致等位基因“丢失”,因为PCR反应没能扩增到DNA片段。这种现象也称随机效应。

      早期经典的DNA定量方法有260nm渡长处的吸光度值和在荧光灯下观察溴化乙啶染色凝胶上的荧光。不幸的是这些方法不够灵敏,并且会消耗宝贵而难得的检材。另外,吸光度法对DNA没有特异性,蛋白质或提取过程残留的苯酚会产生假阳性信号,会给出错误的过高读数e为克服这些问题,出现了很多DNA定量的新方法,包括斑点杂交法、荧光微量滴定法和实时定量PCR。
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