DNA鉴定-石蜡包埋、固定组织DNA的提取

      人体病理组织最常用的固定剂是福尔马林，其他固定剂如乙醇等也有应用。不同固定剂对DNA分析结果的影响差异很大。福尔马林类固定剂对结果影响很大，而乙醇或含乙醇类固定剂对结果的影响较小。
     固定时间越长，DNA抽提率越低，对扩增结果影响越大，常规制片中透明用的二甲苯也可破坏DNA。10%中性甲醛液和丙酮对DNA的扩增结果影响相对较小。
     组织切片中DNA的提取方法1：
      (1)将组织切片剥离在1.5ml的离心管内，在管中加约Iml辛烷，混匀，盖紧后室温放置30min。
      (2) 12000r/min离心Smin，弃去上清，沉淀为组织和残存的石蜡。小心吸去壁上残存的辛烷。重复上述步骤一  次，以彻底去除石蜡。
      (3)加0.5nd无水乙醇，混匀。12000r/min离心Smin，弃去上清，小心吸去乙醇。重复前一步，尽可能除去壁上残存的乙醇（乙醇漂洗可以除去辛烷）。真空干燥或风干，使乙醇完全挥发。
      (4)向上述干燥样品中加入100一200rul消化液（50mmol/L Tris - HCl pH9.0，10mmol/L EDTA，5% Tween - 20，10mg/ml蛋白酶K）。55℃温浴3h或37℃温浴道夜。
      (5)短暂离心，使盖上和壁上蒸发冷凝的水分沉至管底。95℃温浴l0min，灭活蛋白酶K。离心后分装上清(每份1～10µl)，- 20℃保存。
      1．保存太久或较脆的组织在加入辛烷脱蜡后就会破碎，操作应小心以防组织丢失。
      2．干燥样品时，用封口膜封住离心管，并在其上打几个小孔，以防止样品间的交叉污染和来自真空干燥盖上的杂质污染。
      3．干燥样品时，也可向每管中加3滴丙酮，不加盖，小心置于37—500C温浴中以促进丙酮挥发，同时也可除去残存的乙醇。
      4．上述操作的混匀步骤不要用旋涡振荡器混匀，以免机械剪切力造成DNA片段断裂。