1 基因座
选用多态性基因座(如STR、SNP等类型)进行PCR扩增,其中,常染色体STR基因座宜符合如下要求:(1)经过群体遗传学调查,多态性高,非父排除率在0.7以上。(2)经过500次以上减数分裂的家系调查,基因座的突变率在0.002以下。目前,建议采用商品化试剂盒进行检验,检测系统的累计非父排除率应达到99.99%以上。除常染色体基因座外,建议在需要时增加Y-STR、X-STR的检验。其中,Y-STR系统可选择DYS456、DYS389I、DYS390、DYS389II、DYS458、DYS19、DYS385a/b、DYS393、DYS391、DYS439、DYS635、
DYS392、Y GATA H4、DYS437、DYS438、DYS448等基因座进行单倍型检验;X-STR系统可用GATA172D05、HPRTB、DXS6789、DXS6795、DXS6803、DXS6809、DXS7132、DXS7133、DXS7423、DXS8377、
DXS8378、DXS9895、DXS9898、DXS10101、DXS10134、DXS10135、DXS10074等。
2 扩增试剂
建议选用商品化试剂盒(带荧光标记的PCR体系)。若选用其它来源的扩增体系,须经验证、认可后方可用于日常检案。每批检验均应用标准样品(已知浓度和基因型的Control DNA)和(或)以前检验过的、已知基因型的样本作为阳性对照,以不含DNA的样本作为阴性对照。
3 PCR体系与温度循环参数
按试剂盒的操作说明书进行。
4 扩增产物的检测与结果的判读
使用荧光分析仪,对PCR产物进行毛细管电泳分析,使用等位基因阶梯(Ladder)作为参照品来判别样本的基因型,步骤方法按照仪器操作手册。