对于人类组织的性别鉴定,传统的方法是依靠检查性染色质X小题和Y小题,操作不复杂,但灵敏度及正确率均不高。还可用放射免疫分析测定组织的性激素判定性别。如有大大组织(为子宫、前列腺、卵巢、睾丸等),可直接判定性别。如有骨骼,也可根据人类学方法判定性别。现在人体组织性别检测的方法主要靠分子生物学方法,有两类:一类是Y染色体探针杂交,另一类是PCR法,后者由于灵敏度高,可用于微量组织及DNA已降解的组织,且操作方便,现已被广泛使用。
1 Southern 印记杂交技术:首先提取人体组织的DNA,用限制性内切酶消化后电泳,印记转移,变性,然后与同位素标记的Y染色体特异探针杂交。Hirofuni(1988)设计的Y特异性DNA探针为1.9Kb用放射性同位素标记。Ryokobayash(1988)设计的Y特异性DNA探针为3.4Kb用生物素标记,如出现特异性带必定为男性组织DNA,阴性可能为女性组织DNA或DNA含量太少。但该技术需要的DNA量较大,且灵敏较低。不适宜于腐败组织及微量组织的检测。
2 PCR法:用PCR法确定组织性别根据所检测的性染色体,可分为三种方法。一种是Y染色体特异STR基因座的PCR法,第二种是X染色体特异STR基因座PCR扩增,第三种是扩增X染色体和Y染色体上同源的STR基因座确定组织的性别。
①Y染色体特异STR基因座的PCR扩增,常见的有DYZ1、DYS19、DYS385、DYS389、DYS390、DYS391等。DYS385基因座扩增产物为两条带,其余基因座扩增均为一条带。出现特异性带即为男性DNA。但未出现特异性带却不能肯定为女性组织。组织DNA严重降解,扩增体系出问题均可导致扩增失败。
②X染色体特异STR基因座的PCR扩增,Szibor R(1995)测定了STRX1,HPRT,AGATSTR和DXS52等STR的基因型,X染色体特异性STR基因座还有:DXS1060、DXS8051、DXS987、DXS1226、DXS1214、DSX1068、DXS993、DXS986、DSX990、DXS1106、DXS8055、DXS1001、DXS1047、DXA1227、DXS8047、DXS8091、DXS1093。如果扩增产物为2条带,则为女性组织,只有一条带则无法确定是男性组织,还是女性组织。
③X染色体和Y染色体同源STR基因座的PCR法。常用的有AMG(Amelogenin)、ZFP和DXYS156基因座。